�(xì)胞破碎儀的破碎技�(shù)是怎樣的?
在生物產(chǎn)物的分離提取中,如果目標(biāo)物質(zhì)為胞外產(chǎn)物(如霉菌產(chǎn)生的糖化酶等�,其提取�(guò)程較�(jiǎn)單,只需直接�(jìn)行固液分�,獲得澄清的濾液,再�(jìn)行分離純化操作;如果目標(biāo)物質(zhì)為胞�(nèi)�(chǎn)物或多細(xì)胞生物組織中的各種生物分子(如堿性磷酸酶等胞�(nèi)酶、部分外源基因表�(dá)�(chǎn)�(yè)或植物細(xì)胞產(chǎn)物等),都需要事先將�(xì)胞或組織破碎,使目標(biāo)物質(zhì)充分釋放到溶液中而且不失去生物活��
不同的生物體或同一生物體的不同部位的組�,其�(xì)胞破碎的難易程序不一,使用的方法也不相同,如�(dòng)物臟器的�(xì)胞膜較脆弱,容易破碎,植物和微生物由于具有較�(jiān)固的纖維�,半纖維素組成的�(xì)胞壁,要采取專門的細(xì)胞破碎方法�
�(xì)胞破碎儀的破碎方�
按照是否存在外加作用�,細(xì)胞破碎儀的破碎方法可分為�(jī)械法和非�(jī)械法兩大�。機(jī)械破碎中�(xì)胞所受的�(jī)械作用力主要有壓縮力和剪切力,非�(jī)械破碎主要利用化�(xué)或生化試劑(如酶)改變細(xì)胞壁或細(xì)胞膜的結(jié)�(gòu)而釋放胞�(nèi)物質(zhì)�
�(xì)胞破碎儀�(jī)械破碎法
通過(guò)�(jī)械運(yùn)�(dòng)所�(chǎn)生的剪切力的作用,使�(xì)胞破碎的方法稱為�(jī)械破碎法。機(jī)械破碎法是工�(yè)�(guī)模細(xì)胞破碎的主要手段,具有處理量�,破碎效率高,速度快等特點(diǎn),適用于植物材料和細(xì)菌細(xì)胞的破碎。按照所使用的破碎機(jī)械的不同,可以分為搗碎法,珠磨法,勻漿法和超聲波破碎法等�
1,細(xì)胞破碎儀搗碎�。利用搗碎機(jī)高速旋�(zhuǎn)葉片鎖產(chǎn)生的剪切力將組織�(xì)胞破碎,是一種較劇烈的破碎細(xì)胞的方法。�??上扔眉矣檬称芳庸C(jī)將組織打碎,然后再用10000~20000r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機(jī)(即高速分散器)將組織的細(xì)胞打�,為了防止發(fā)熱或升溫�(guò)�,通常是轉(zhuǎn)10~20s,停10~20s,可反復(fù)多次�
搗碎法適用于�(dòng)物組�,內(nèi)�,植物種�,嫩菜葉,較柔軟的果蔬等材料的破碎。但由于旋轉(zhuǎn)刀片的�(jī)械剪切力較大且破碎過(guò)程中溫度易迅速上�,不適于核酸等生物大分子的提��
2,細(xì)胞破碎儀琢磨法。琢磨是一種常用的�(jī)械破碎細(xì)胞的方法,將玻璃小珠與細(xì)胞懸浮液一起快速攪拌。由于研磨作�,使�(xì)胞獲得破�,常用的工業(yè)�(shè)備是高速珠磨機(jī)。該法適用于絕大多數(shù)微生物細(xì)胞的破碎。如采用高速濕法珠磨分離純化重組人腫瘤壞死因子�(shí),菌體經(jīng)間歇式珠磨機(jī)破碎3min,玻璃珠直徑�0.25~0.50mm,裝珠量為破碎室總體積的85%,攪拌轉(zhuǎn)�1500r/min,破碎液�4攝氏��15000r/min離心15min后去除細(xì)胞碎片。本條件下,目標(biāo)蛋白回收率可�(dá)90.3%,活性回收率�85.8%�
3,細(xì)胞破碎儀高壓勻漿法。高壓勻漿破碎又稱高壓剪切破碎法。其破碎原理是:�(xì)胞懸浮液在高壓作用下從閥座與閥之間的�(huán)隙高速噴出后撞擊到碰撞環(huán)上,�(xì)胞在受到高速撞擊作用后,急劇釋放到低壓環(huán)境,從而在撞擊力和剪切力等的綜合作用下破碎�